大鼠肝纤维化模型肝组织及血清中基质金属蛋白酶抑制因子-1的动态变化

摘要

目的 观察二甲基亚硝胺(DMN)构建大鼠肝纤维化模型过程中肝组织及血清中TIMP-1及其相关指标的动态变化.方法 1%DMN按10 mg/Kg腹腔注射方法建立大鼠肝纤维化模型,第1 w连续注药3 d,第2、3、4、5、6w各连续2 d.分别于第1、2、4、6、8w随机取血及大鼠肝组织.ELISA方法测血清基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅰ型前胶原(Ⅰ-CP)、Ⅲ型前胶原(Ⅲ-CP)含量.肝组织HE、Masson染色观察肝病理变化、胶原纤维含量,原位杂交观察TIMP-1 mRNA表达;免疫组化观察TIMP-1蛋白表达量.结果 注药后1 w,血清TIMP-1即开始升高,4w后维持高值(131.1±13.16)ng/ml,肝组织内TIMP-1 mRNA及蛋白同步增高;1 w时,MMP-1含量增高,2 w处于高峰(79.3±8.45)ng/ml,随后缓慢降低,8 w时含量最低(46.6±6.31)ng/ml,然而仍高出正常对照组(32.1±3.66)ng/ml;1 w时,HA含量升幅达对照组2倍,后持续增高,至6 w时处高峰(350.8±40.26)ng/ml;LN于1 w、2 w、4 w均小幅递增,6 w达高峰(132.8±15.1)ng/ml;CP-Ⅰ含量注药后1 w始较对照组升高,6 w处高峰(27.2±3.60)ng/ml;CP-Ⅲ含量用药后小幅升高,6 w处于高峰(9.06±1.22)ng/ml.肝胶原纤维百分含量4 w小幅递增,4 w后,肝胶原纤维显著持续增高,8w时最高.大鼠肝组织病理变化显示:1 w可见肝细胞变性及小点状坏死灶,4w时,纤维间隔伴小叶结构紊乱,符合肝纤维化3级,6 w小部分3级,大部4级;8 w,肝硬化表现.结论 DMN构建大鼠肝纤维化模型肝组织及血清相关指标呈动态递进发展,为进一步选择合适时机干预肝纤维化进程提供依据、奠定基础.