拟南芥吲哚-3-甘油磷酸合酶免疫分析

摘要

吲哚３甘油磷酸合酶（ＩＧＳ，ｉｎｄｏｌｅ３ｇｌｙｃｅｒｏｌｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＥＣ４．１．１．４８）在色氨酸与吲哚乙酸的生物合成途径中，催化生成吲哚３甘油磷酸。研究该基因的表达调控，对于阐明高等植物是如何调控色氨酸及生长素合成是十分重要的。利用已克隆的ＩＧＳｃＤＮＡ，构建了谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ，ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＥＣ２．５．１．１８）与吲哚３甘油磷酸合酶融合蛋白的表达质粒，并将其导入到在异丙基βＤ硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导下能高效表达的ＩＧＳ基因缺陷菌株ｔｒｐＣ９８００λＫＣ大肠杆菌中。高表达的融合蛋白通过谷胱甘肽琼脂糖（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅａｇａｒｏｓｅ）亲和层析和ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化后，用以免疫兔子制备抗血清。免疫印迹法分析表明拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）四种常用生态型只合成一种分子量约为４０ｋＤ的吲哚３甘油磷酸合酶蛋白。在Ａｇ＋、紫外线等逆境条件下，ＩＧＳ含量都有较大幅度的增加，这说明ＩＧＳ可能与植物的防御反应紧密相关。