异氟烷调控NF-κB∕iNOS-COX2信号通路抑制三叉神经节卫星胶质细胞炎症的研究

摘要

目的研究异氟烷(ISO)对离体大鼠三叉神经节卫星胶质细胞炎症的影响,并初步探讨相关机制。方法体外培养大鼠三叉神经节卫星胶质细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测并筛选合适的ISO浓度;将细胞按随机数字表法分为对照组、模型组、ISO组和SN50[核转录因子(NF)-κB抑制剂]组,采用硝酸甘油(GTN)构建卫星胶质细胞炎症模型,其中ISO组用1.5%ISO以2 L/min的速率处理30 min,其余组用相同速率的空气处理30 min,每组设6个复孔;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法和一氧化氮(NO)检测试剂盒检测细胞上清液中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)水平和NO的含量,采用Western blotting法测定细胞中NF-κB p65、环氧合酶2(COX2)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达情况,采用Fluo-3/AM探针负载法检测钙离子浓度。结果ISO组IL-1β、TNF-α、PGE2、NO水平及钙离子浓度分别为(121.49±12.37)ng/L、(88.41±9.53)ng/L、(439.92±28.81)pg/mL、(9.03±1.04)μmol/L、(101.11±8.23)mmol/L,均明显低于模型组(均P<0.05);Western blotting检测发现,ISO组NF-κB p65、COX2及iNOS蛋白表达分别为0.74±0.15、0.59±0.14、0.51±0.11,均明显低于模型组(均P<0.05)。SN50组各指标变化趋势与ISO组一致。结论适当剂量的ISO可以抑制GTN诱导的三叉神经节卫星胶质细胞炎症,其机制可能与减少炎症因子释放、抑制NF-κB/iNOS-COX2信号通路的激活、降低钙离子浓度有关。