光动力疗法联合NS-398抑制Bcl-2促进QBC939细胞凋亡的机制研究

摘要

目的研究光动力疗法(PDT)和选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398联合对人胆管癌细胞QBC939凋亡的影响及其机理。方法 QBC939细胞体外培养后分组:光动力组、NS-398组、联合实验组和空白对照组,分别将0、2、4、6、8、10μg/mL浓度的血卟啉衍生物(HPD)在0、5、10、15 J/cm2的光照强度和0、25、50、100、200μmol/L浓度的NS-398联合作用于QBC939细胞;采用细胞增殖实验(CCK8)检测生长抑制率(R);流式细胞法检测细胞凋亡;荧光定量RT-PCR检测Bcl-2基因表达;免疫细胞化学测定细胞浆中Bcl-2表达;ELISA测定细胞上清中Bcl-2蛋白。结果 PDT和NS-398在体外均能抑制QBC939细胞生长,当HPD浓度8μg/mL,光照强度5 J/cm2联合50μmol/L的NS-398,R值约达95%,联合实验组与其他3组比较均有统计学差异(P<0.05),继续增加2种强度,R变化不明显;流式细胞法表明PDT和NS-398联合能促进QBC939细胞早期凋亡(F=3 224.753,P<0.001)。荧光定量RT-PCR显示联合能抑制细胞中Bcl-2表达(F=6 262.227,P<0.001);SP免疫细胞化学显示联合能抑制细胞浆中Bcl-2表达(F=1 355.577,P<0.001);ELISA显示联合能抑制细胞上清中Bcl-2分泌(F=5 123.387,P<0.001)。结论 PDT和NS-398联合可明显抑制QBC939细胞生长,诱导早期凋亡,对生长的抑制可能是通过抑制Bcl-2基因和蛋白的表达,促进其早期凋亡实现的。