高效液相色谱法测定补骨脂中新补骨脂异黄酮含量

摘要

目的用高效液相色谱法（ high performance liquid chromatography, HPLC）建立补骨脂中新补骨脂异黄酮的含量测定方法。方法使用色谱柱WondaSil C18 （150．0mm×4．6mm，5μm），以0．05％三氟乙酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，采用梯度洗脱HPLC法，流速为1．0ml／min，检测波长为254nm，柱温为30℃，进样量为20μl。100％甲醇超声30min提取新补骨脂异黄酮。同种浓度的对照品溶液重复进样6次测定对照品的精密度。平行制备6份新补骨脂异黄酮样品溶液以检测样品溶液的重复性。同一新补骨脂异黄酮样品溶液不同时间段进样5次，测样品溶液的稳定性。平行制备6份样品溶液加入等量的对照品计算加样回收率。结果通过优化色谱条件，建立了中药补骨脂中新补骨脂异黄酮含量的测定方法，考察了专属性、标准曲线、检测限与定量限、精密度、重复性、稳定性、加样回收率。通过方法学考察，新补骨脂异黄酮的线性回归方程为：A=79375C-9063．7，R2=0．999，在0．75～12．00μg／ml的浓度范围内，新补骨脂异黄酮的浓度与峰面积呈良好的线性关系。样品平均加样回收率为97．51％，RSD=1．21％（n=6）。精密度、重复性、稳定性及回收率均良好。不同来源的补骨脂药材中新补骨脂异黄酮的含量差异有统计学意义。结论结果表明所建立的补骨脂中新补骨脂异黄酮的HPLC检测方法操作简便、准确可靠，具有较好的重复性与稳定性，适用于补骨脂的质量控制。