二氮嗪通过抑制内质网应激作用降低软骨细胞凋亡的研究

摘要

目的探讨二氮嗪对H_2O_2诱导的软骨细胞凋亡的机制研究。方法每组取3只SD大鼠膝关节软骨细胞进行原代培养,将软骨细胞分成6组,分别为对照组(A组),H_2O_2损伤组(B组),H_2O_2+100μmol/L二氮嗪组(C组),H_2O_2+200μmol/L二氮嗪组(D组),H_2O_2+300μmol/L二氮嗪组(E组),H_2O_2+400μmol/L二氮嗪组(F组)。A组细胞不做特殊处理,B组用400μmol/L双氧水在37℃恒温箱内孵育8 h,C、D、E、F组分别用100、200、300、400μmol/L的二氮嗪在37℃的恒温箱内预处理30 min,再用400μmol/L的H_2O_2孵育8 h,用CCK8法检测各组软骨细胞的活性,用流式细胞仪检测各组软骨细胞凋亡情况,用Rt PCR检测软骨细胞功能情况,用免疫荧光、Western Blot检测凋亡和内质网应激相关蛋白的表达情况。结果 (1)CCK8法检测各组细胞的活性率从大至小依次为A组>E组>D组>F组>B组;(2)流式细胞仪检测各组软骨细胞凋亡率由大至小依次为B组>F组>D组>E组>A组;(3)Rt PCR检测软骨细胞二型胶原蛋白(Coll-Ⅱ)、Caspase-3和聚集蛋白聚糖酶(aggrecanase)表达量,表达量大至小依次为A组>E组>D组>F组>B组;各组聚集蛋白聚糖酶表达量大至小依次为B组>F组>D组>E组>A组;(4)免疫荧光检测软骨细胞中CHOP蛋白的表达量,各组表达量依次是B组>F组>A组;(5)Western bolt检测各组软骨细胞中Caspase-3、Bax、CHOP蛋白的表达情况,表达量依次为B组>F组>A组。结论二氮嗪通过抑制内质网应激作用,从而减少H_2O_2诱导的大鼠软骨细胞的凋亡。