丁苯酞对于糖氧剥夺条件下人脑微血管内皮细胞能量代谢的影响及保护作用

摘要

目的:研究糖氧剥夺(OGD)条件下丁苯酞(NBP)对于人脑微血管内皮细胞(HBMEC)能量代谢的影响及保护作用。方法:采用糖氧剥夺(OGD)方法处理HBMEC细胞,将细胞分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。其中对照组为正常培养的HBMEC细胞、模型组为OGD处理的细胞、低剂量组为OGD+5μmol/L的NBP、中剂量组为OGD+10μmol/L的NBP、高剂量组为OGD+20μmol/L的NBP。采用CCK-8试剂盒检测细胞活力;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、钠-钾-三磷酸腺苷酶(Na+-K+-ATPase)和钙-三磷酸腺苷酶(Ca2+-ATPase)活性、细胞内钙离子的浓度;流式细胞术检测细胞凋亡率; Hoechst33342法进行活细胞染色;高效液相色谱法检测细胞中磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)、三磷酸腺苷(ATP)的含量,能荷EC值。结果:模型组中细胞活力、Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase的活性降低,而细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率明显提高,能量代谢中模型组ATP、ADP的含量降低,AMP含量增高,EC值明显降低。NBP干预后可以提高细胞活力,提高Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase酶活性,降低细胞中钙离子浓度和细胞凋亡率,且还可以提高细胞中ATP、ADP的含量,降低AMP的含量,提高EC值,具有剂量依赖性。结论:NBP可以保护HBMEC在OGD条件下的损伤,其作用机制和改善细胞能量代谢、抑制细胞内超钙有关。