外周血中外泌体检测在喉癌下咽癌早期诊断中的临床研究

摘要

目的提取并检测喉癌、下咽癌的患者外周血中外泌体(exosomes)并探讨其临床意义。方法收集我院2015年6月～2017年6月共计22例头颈肿瘤患者术前外周血,其中喉癌11例,下咽癌11例,所有患者均术后病理明确诊断,并收集11例正常人血液作为对照组,用试剂盒System Biosciences(EXOTC10A-1)提取exosomes。采用透射电子显微镜下观察exosomes形态,纳米粒子跟踪分析(NTA)对exosomes进行计数(即颗粒浓度)和测粒径,蛋白浓度定量试剂盒(BCA)检测exosomes蛋白浓度,蛋白质免疫印迹(WB)检测蛋白的表达。结果喉癌组和下咽癌组的上清液中可以分离出肿瘤来源的exosomes,透射电子显微镜下观察具有杯状结构的特征,直径在30～100 nm,其体积比对照组更大。喉癌组及下咽癌组的exosomes蛋白浓度与对照组相比显著增加。三组exosomes中均检测到CD63蛋白及CD81蛋白,未检测到Calnexin蛋白,exosomes颗粒浓度各组间无明显差异。与对照组比较,喉癌组exosomes粒径增加但无显著差异,下咽癌组的exosomes粒径显著增加。结论喉癌、下咽癌患者外周血清来源的exosomes是十分有潜力的肿瘤标志物,可能对喉癌、下咽癌的早期诊断带来帮助。