CEA迷你基因原核表达及其诱导小鼠特异性淋巴细胞增殖的研究

摘要

目的在原核细胞中表达人癌胚抗原（CEA）的迷你基因短肽，纯化及鉴定目的蛋白，并检测其在小鼠体内的抗原性。方法利用PCR技术从人基因组中得到一段来源于CEA的DNA序列，其中包含两个编码分别能被HLA—DR4／9、HLA—DR53以及HLA-DR4／7／9型别的人群所识别辅助性T细胞（HTL）表位的迷你基因，构建重组表达质粒pQE30-CEA625-667，在大肠杆菌M15中诱导表达。Westren Blot杂交鉴定、镍凝胶亲和层析法纯化目的蛋白。3H—TdR掺入法检测目的短肽诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应。结果CEA625-667短肽在大肠杆菌M15中以包涵体形式表达。Western—blot结果显示，在相对分子质量约6700处有表达产物与6×hismAb特异性结合带。镍柱纯化后可得到纯化的目的蛋白.3H-TdR掺入实验所得不同浓度的CEA625-667与小鼠脾细胞共孵育7～9d后的刺激指数相继达到对照组的10倍以上。结论成功诱导了CEA625-667短肽的原核表达，通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的CEA625-667短肽，并证明在一定浓度下目的短肽可于体外诱导小鼠的特异性淋巴细胞增殖。为CEA625-667迷你基因作为表位疫苗在抗肿瘤方面的进一步研究提供条件。