50L规模中试发酵重组核苷二磷酸激酶A工程菌

摘要

中试规模发酵重组人核苷二磷酸激酶A（rhNDPK-A）工程菌，并对表达产物进行纯化。摇瓶培养一级种子至合适密度，以10％比例接种二级种子培养基，在7L发酵罐中培养至OD600为9．6～10．5，然后转入80L发酵罐中进行补料分批培养，所得菌体裂解后，经离子交换层析和亲和层析两步纯化得重组蛋白制品。结果表明，50L培养液经过10h培养后，湿菌收量为156％／批，NDPK—A表达量为23．8％。另外，补料方式对发酵密度有明显影响。与单纯补加碳源相比，同时补加碳源和氮源可以显著提高菌体产量，但对目的蛋白表达量的提高不明显。在较优条件下，菌体产量为（2220．00±169．71）g／批，蛋白表达量为（22．00±0．42）％，纯化后重组蛋白得率为510mg／L。产物可溶、密度适中、工艺简便的中试发酵条件的建立为高得率、大规模制备重组rhNDPK—A奠定了基础。