HCV体外复制细胞模型的建立

摘要

目的建立HCV体外复制细胞模型。方法用含有生长HCV基因的p90/HCVFL-longpU质粒,转化Sure细胞,36℃摇菌18h,提取质粒,以线性化DNA为模板,用T7RNA体外转录系统作体外转录,转录产物RNA作RT-PCR、普通琼脂糖凝胶电泳鉴定。采用lipofectin包裹HCVRNA转染生长良好的HepG2细胞。转染48h后收集细胞,TRIzol提取RNA,分别用正链及负链引物作RT-PCR,确定转染细胞中有无HCV的复制中间体及病毒核酸。作免疫组化确定有无病毒NS3、NS5抗原。结果体外可获得高浓度全长HCV-RNA,但转染未获成功。结论全长HCV-RNA转染细胞模型的建立尚需进一步研究。