支持HCV 1b亚基因组复制的细胞模型的建立

摘要

目的 建立一个稳定支持中国人群HCV 1b亚基因组高效复制的体外细胞模型.方法 构建中国人群HCV1b亚型亚基因组复制子质粒,通过体外转录的方法获得亚基因组复制子RNA,采用电穿孔技术把RNA转染到Huh-7.5.1细胞中,经过G418筛选含有HCV 1b亚基因组的细胞集落.RT-PCR检测细胞集落中的HCV亚基因组以及Western blot检测细胞集落中的HCV蛋白的表达.用干扰素(IFN)处理含有HCV亚基因组的细胞,观察细胞中HCV RNA的变化.结果 G418药物筛选得到了支持HCV1b亚基因组复制的细胞集落.RT-PCR检测有HCVRNA NS4B的表达,Western blot检测有HCV的非结构蛋白NS5B的表达.IFN处理含有HCV复制子的细胞,HCVRNA水平明显降低.结论 成功建立了支持中国人群HCV 1b亚基因组高效复制的体外细胞模型,为进一步研究HCV致病机制、治疗药物筛选及疫苗方面的研究打下了基础.