抗人精浆磷脂酶A2单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

摘要

目的 :制备并鉴定人精浆磷脂酶A2 (PLA2 )的单克隆抗体 (McAb)。　方法 :通过PEG沉淀、SephacrylS 30 0柱层析、DEAE SephadexA 2 5柱层析及羟基磷灰石 (HA)柱层析分离纯化人精浆中的PLA2 ,并以SDS PAGE鉴定其分子量及蛋白浓度 ;免疫BALB/C小鼠制备抗PLA2McAb ,通过ELISA技术、Western Blot方法鉴定其敏感性及特异性。　结果 :从精浆中提纯的PLA2的相对分子质量 (Mr)约为 3490 0 ,纯化倍数约为 2 4 5倍。制备的McAb经鼠Ig亚类分析为IgMKappa型 ,敏感性可达 1∶5 6～ 1∶5 8,Western Blot证明其特异结合的抗原即为PLA2蛋白酶。结论 :Mr为 3490 0的PLA2可能为一种新型PLA2。