人乳头瘤病毒16长调控区内meCpG位点去甲基化对HPV阳性头颈肿瘤细胞的影晌

摘要

目的探讨人乳头瘤病毒-16(Human papillomavirus,HPV-16)长调控区内meCpG位点的去甲基化对3种HPV阳性头颈肿瘤细胞的影晌。方法采用5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2~'-deoxycytidine,5-Aza-2~'-dc)处理后,应用BSP法检测UM-SCC47、CaSki及SiHa3种HPV-16阳性肿瘤细胞长调控区内CpG位点的甲基化状态;采用实时荧光定量PCR法检测HPV-16 E6与E7 mRNA的表达水平;检测5-Aza-2~'-dc对细胞生长、细胞凋亡的影响;采用Lipo Infectamine RNAiMAX转染siRNA,对E6和E7表达进行沉默,随后检测细胞増殖抑制、凋亡以及周期等生物学状态的变化。结果采用浓度为0.5μmol/L的5-Aza-2~'-dc对细胞进行96 h的处理具有最好的去甲基化效果。用5-Aza-2~'-dc去甲基化处理后,UM-SCC47细胞和CaSki细胞内E6与E7 mRNA的表达水平明显降低,相比对照组差异均有统计学意义(t=1.356、2.623,P=0.031、0.005;t=1.798、2.015,P=0.011、0.009);SiHa细胞E6与E7 mRNA的表达水平较对照组无明显差异(t=1.591、1.153,P=1.105、0.753)。用5-Aza-2~'-dc处理后,细胞增殖受到明显抑制。对E6与E7表达进行沉默后,3种细胞的生长均受到抑制。3种细胞调亡情况均明显增加,阻滞于S期、G2/M期的细胞均明显增加,与对照组相比差异均有统计学意义。结论去甲基化处理后,长调控区内甲基化状态不同的HPV-16阳性肿瘤细胞的反应完全不同,说明在HPV-16阳性肿瘤中,可能存在关于长调控区内甲基化状态的不同的肿瘤特性与癌症发生机制。