肝细胞生长因子对人外泌汗腺上皮细胞促增殖作用的研究

摘要

目的研究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对培养的人外泌汗腺上皮细胞(human eccrinesweat gland epithelial cells,hESGc)的促增殖作用,以及细胞内磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase1/2,p-ERK1/2)蛋白的表达。方法在无血清角质形成细胞培养基(keratinocyte serum free medium,KSFM)中培养hESGc,取第1代细胞进行实验。免疫组织化学染色检测C-met表达。MTT法检测HGF对hESGc的促增殖作用,实验分为3组:空白组、对照组和实验组。空白组仅含200μL KSFM;对照组于96孔板以2×103个/孔接种hESGc,并加入200μLKSFM;实验组于96孔板以2×103个/孔接种hESGc并加入200μLKSFM后,再分别加入不同浓度(2、20、40、80ng/mL)HGF。实验组于加入各浓度HGF前以及加入后2、4d,观察细胞增殖情况。实验组于加入40ng/mL HGF后即刻,5、30、90和120min,采用Westernblot方法检测细胞内p-ERK1/2表达规律。结果hESGc抗-C-met免疫组织化学染色胞浆可见阳性染色,细胞核染色为蓝色。MTT法检测示40、80ng/mL HGF对hESGc具有显著促增殖作用(P0.05)结论HGF可促进hESGc增殖,并能引起ERK1/2蛋白磷酸化。