骨形态发生蛋白3基因转染成纤维细胞后细胞形态及生物学变化

摘要

目的　通过基因转染方法 ,用骨形态发生蛋白 3(BMP3 )基因转染成纤维细胞 (NIH 3T3细胞 ) ,观察转染不同时期被转染细胞的形态学改变及细胞内碱性磷酸酶含量的变化 ,初步探讨骨组织工程种子细胞来源的另一途径。方法　定向克隆法将BMP3 基因构建于PcDNA3表达载体 ,脂质体介导法转染NIH 3T3细胞 ,G418筛选获得稳定转化体 ,观察不同时期被转染细胞的形态学变化 ,钙钴法染色转染细胞不同时相的碱性磷酸酶并作图像分析。结果　转染细胞培养筛选 6周提取的总RNA用Dotblot可以检出有明显的BMP3 mRNA表达。转染细胞第 1周细胞形态由长梭形变为杆状 ,转染后 2周细胞由长梭形变为多角形 ,转染后 4周细胞变为多边形 ,类似成骨细胞 ,钙钴法碱性磷酸酶染色示转染组细胞胞浆内有大量染成黑色的碱性磷酸酶颗粒 ,及图像分析示转染细胞内碱性磷酸酶明显高于同期对照组 ,两组间有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　通过向NIH 3T3细胞内转染BMP3 基因 ,可以使NIH 3T3细胞形态向成骨细胞形态发生转化 ,被转染细胞内碱性磷酸酶水平明显增高 ,已具有成骨细胞的某些特性。