人结合上皮细胞体外培养与冻存方法的改良

摘要

目的:改良人结合上皮(junctional epithelium,JE)细胞的分离培养及冻存方法。方法:取正畸拔除的牙周组织健康的前磨牙,沿龈缘剪去冠方1mm左右的沟内上皮,用无菌11号刀片紧贴牙面刮下、剪碎JE组织,简化培养操作步骤。取第2代JE细胞,加入冻存液,按设定的降温程序(从0℃开始,以每分钟下降1.5℃速度下降至-18℃,保持5min;再以每分钟下降20℃的速度降至-80℃,然后投入-196℃液氮罐)冻存细胞,40℃水浴复苏,进一步研究JE细胞的形态、增殖、鉴定及复苏后存活率等生物学活性。结果:不用Dispase冷消化,采用0.1%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化,同样可成功地培养人JE细胞;JE细胞复苏后的存活率为(93.87±3.11)%,生长状况良好,与第2代细胞相似;免疫细胞化学染色显示,培养的JE细胞角蛋白-19(cytokeratin-19,CK19)表达强阳性,而波形丝蛋白(vimentin)表达也为阳性。结论:改良的JE分离培养与冻存方法可行,JE表型在体内和体外并非完全一致,可能与细胞生长的底物有关。