人源S100A1蛋白的表达纯化与鉴定

摘要

目的构建pBV220-S100A1表达载体,表达并纯化人源S100A1蛋白,为进一步研究人源S100A1蛋白相关的生物学功能及应用于临床诊断奠定基础。方法采用全基因合成法合成人源S100A1基因;通过GeneBank查询人源S100A1蛋白的氨基酸序列,进行序列优化设计,同时引入EcorI和BamHI酶切位点,构建原核表达载体pBV220-S100A1,热应激诱导其在大肠杆菌(E.coli DH5α)中表达,采用离子交换层析法纯化人源S100A1蛋白,最后采用Transwell迁移实验检测所纯化蛋白的生物活性。结果酶切鉴定和测序分析显示,人源S100A1的基因被成功插入pBV220多克隆位点;S100A1的基因片段在pBV220中的插入位点、碱基序列及读码框和终止子的次序完全正确;S100A1的基因序列位于表达载体pBV220的序列下游。经诱导表达和纯化,最终获得了人源S100A1蛋白,且经迁移实验证明,该纯化蛋白具有较高的生物活性。结论成功建立了人源S100A1蛋白表达载体,表达菌株经诱导表达和纯化,获得了高纯度的蛋白。