金属硫蛋白 - 潜伏膜蛋白融合基因的体外转录调控

摘要

ＥＢ病毒（ＥＢＶ）是一种与地区性伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金氏病等多种人体肿瘤有关的疱疹病毒．已往的研究表明，潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）基因是ＥＢＶ最可能的致瘤基因．为制备ＬＭＰ基因转基因小鼠，探讨ＬＭＰ的体内致瘤作用，首先构建了含鼠金属硫蛋白－１（ＭＴ－１）基因调控区和ＬＭＰ基因编码区的ｐＢＲ３２２－ＭＴ－ＬＭＰ质粒，并用电击法将该质粒与ｐＫＪ１－Ｎｅｏ质粒共转染人胃癌细胞株ＭＧＣ，对ＭＴ－ＬＭＰ基因在转染细胞中的整合、转录情况及重金属镉和镍对该融合基因的转录调控进行了研究．结果表明：（１）两质粒共转染效率为８６．７％；（２）ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析显示，完整的ＭＴ－ＬＭＰ基因已整合入转染的ＭＧＣ细胞基因组，且在不同的转染细胞克隆中，ＭＴ－ＬＭＰ基因整合的方式及拷贝数不同，拷贝数从１到１９不等；（３）ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析证实，ＭＴ－ＬＭＰ基因不仅在转染的ＭＧＣ中能够转录，而且在１０μｍｏｌ／Ｌ镉诱导下，ＭＴ－ＬＭＰ基因转录增强，平均增高约１．４倍．结果说明，在ＭＴ－１基因调控区指导下，ＬＭＰ基因不但有ｍＲＮＡ水平的表达，而且其表达受重金属镉的调控，上述结果为制备ＭＴ－ＬＭＰ转基因小鼠?