小鼠子宫内膜原代上皮细胞及间质细胞的优化分离和培养

摘要

目的:建立一种获得高纯度、高活性的子宫内膜上皮细胞和间质细胞的优化分离和体外培养的方法,提供研究子宫内膜相关疾病的理想体外模型。方法:双酶消化、过滤、离心法分离和培养小鼠子宫内膜上皮细胞和间质细胞。用光镜观察培养细胞;双重免疫荧光标记法检测上皮细胞角蛋白(CK)和间质细胞波形蛋白(Vim)的表达;MTT法测定间质细胞的生长曲线。结果:培养24h,小鼠子宫内膜上皮细胞呈多边形、铺路石样生长,CK免疫荧光阳性,纯度达95%以上。正常原代小鼠子宫内膜上皮细胞不能传代,培养5～6天后细胞逐渐走向衰老。间质细胞呈长梭形、漩涡状生长,Vim免疫荧光阳性,纯度达95%以上。原代间质细胞可有限传代,3代内细胞形态无改变。传代间质细胞第3～6天为细胞对数生长期,生长曲线呈"S"形,倍增时间约为56.97h。结论:双酶消化、过滤、离心法可获得高纯度、高活性的具有典型的生物学细胞特性的子宫内膜上皮细胞和间质细胞。