无创与有创呼吸机治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重相关呼吸衰竭对比分析并人及小鼠原代气道上皮细胞的分离和气液界面培养

摘要

背景：无创机械通气的应用降低了慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）患者的死亡率，这篇回顾性研究设计为无创机械通气（NIV）与有创机械通气(IMV)治疗AECOPD引起的呼吸衰竭的效果及结局的对比分析。
　　方法：患者根据入院情况应用NIV或IMV。监测的临床参数包括治疗前呼吸频率、血压、心率以及治疗前后的PH、PaCO2、PaO2，伴随疾病例如肺性脑病、高血压、慢性心功能不全、糖尿病、肺炎、哮喘等。人口统计学信息包括年龄、性别、住院天数及疾病转归等，均记录下来。
　　结果：共40名患者入组，其中27位录入NIV组，13位录入IMV组。NIV组的患者平均年龄为73.86岁，IMV组患者平均年龄为70.75岁（p>0.05）。在NIV组中入院时PH、PaCO2、PaO2平均值分别为7.29±0.94、86.79±27.32mmHg、64.39±22.28mmHg；IMV组上述指标平均值分别为7.26±0.13、84.55±26.72mmHg及71.25±26.41mmHg（p>0.05）。NIV组WBC、PCT分别为8.23±3.82(×109/L)、0.14±0.21(ng/ml)，IMV组分别为15.96±4.88(×109/L)、0.84±0.79(ng/ml)（p<0.05）。NIV组平均住院日为10.71±3.609天，IMV组为8.75±2.137天(p>0.05)。NIV组的总死亡数为2例（5%），而IMV组死亡数为5例(38%)(p<0.05)。
　　结论：这项研究提示应用NIV治疗AECOPD引起的呼吸衰竭是一种有效的治疗方式，具有可接受的成功率及较低的死亡率。NIV的应用减少了气管插管率及其带来的并发症。肺部感染可加重肺性脑病的意识障碍，一般优先选择IMV。
　　目的：建立简单有效的人及小鼠气道上皮细胞原代培养的方法，在气液界面培养的条件下，构建假复层纤毛柱状上皮的模型。
　　方法：通过组织贴块法、蛋白酶XIV低温消化法获得原代人及小鼠气道上皮细胞，利用无血清的上皮细胞培养基（BEGM）进行培养、传代，获得的第2或3代细胞进行形态学及角蛋白免疫荧光鉴定。然后利用Transwell小室进行气液界面培养，实现假复层纤毛柱状上皮模型的构建，并进行形态学的鉴定。
　　结果：组织贴块法及蛋白酶XIV低温消化法均成功分离出人及小鼠原代气道上皮细胞，无血清的上皮细胞培养基培养在组织块法获得的人气道上皮细胞可传至4代，细胞形态更好、纯度更高、活力更强，但细胞获得周期长，数量扩增较慢。低温酶消化法获得人气道上皮细胞周期短，数量扩增快，但细胞易老化及成纤维细胞污染。对传至2-3代的人气道上皮细胞进行角蛋白免疫荧光鉴定，两种方法上皮细胞达到99%以上，细胞纯度高。在Transwell小室中气液界面培养4周进行冰冻切片的免疫荧光鉴定呈多层分布。
　　结论：组织贴块法及低温酶消化法是2种简单有效获得人及小鼠原代气道上皮细胞的方法，获得的细胞形态好，纯度高，活力强。气液界面培养的条件下气道上皮细胞培养4周后可形成假复层纤毛柱状上皮模型，成为进一步呼吸道相关研究的基础。

目录

声明

第一部分 临床部分无创与有创呼吸机治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重相关呼吸衰竭对比分析

前言

资料与方法

1.病例入选标准

2.治疗方法

3.收集和记录指标

4.统计学处理

结果

1.患者一般情况

2.两组入院时伴随疾病情况及生化指标

3. 治疗结局

讨论

结论

参考文献

第二部分 基础研究人及小鼠原代气道上皮细胞的分离和气液界面培养

前言

材料与方法

1.材料

2.实验方法与步骤

结果

3.1气道上皮细胞形态学观察

3.2角蛋白免疫荧光鉴定

3.3 ALI培养

讨论

结论

参考文献

综述:原代气道上皮细胞及气液界面培养应用研究进展

致谢