多重RT-PCR同步检测A组轮状病毒P基因型

摘要

目的　建立A组轮状病毒VP4基因型的多重PCR分型方法 ,并用此方法对武汉地区婴幼儿腹泻样本进行检测。方法　在分析A组轮状病毒VP4基因的基础上 ,选取引物con2、con3进行第一轮RT -PCR ,然后以A组轮状病毒 5个P基因型P[6 ]、P[8]、P[9]、P[4 ]和P[10 ]的特异性引物 ,进行第二轮巢式PCR ,建立多重巢式RT -PCR同步检测A组轮状病毒P基因型技术。结果　利用该方法可以同时检出 5种不同基因型标准株混合物中的各个型别。将纯化的A组轮状病毒标准株RNA系列稀释后 ,用本方法进行检测 ,其灵敏度为 0 1ng/μl。同时还对 4 0份从武汉市儿童医院采集的A组轮状病毒阳性的腹泻儿童大便样本进行检测 ,其中P[8]有 2 9例、P[4 ]有 5例 ,另外发现有P[8]与P[4 ]混合感染 4例。说明该方法对实际样本中的混合感染也能很好地分型。结论　应用多重巢式RT -PCR对A组轮状病毒基因型研究将为临床诊断和实验研究提供一种快速、灵敏和特异的检测手段。