共固定化TNF-α/IFN-γ对宫颈癌HeLa细胞的长效抑制作用

摘要

利用光化学固定方法,将TNF-α/IFN-γ共同固定在组织培养聚苯乙烯培养孔内,选择最佳固定细胞因子剂量20ng/well,对HeLa细胞行长效性实验研究。培养时间为1d、2d、3d、4d、5d和6d。同时设游离TNF-α+IFN-γ与纯无血清培养对照组。计算TNF-α/IFN-γ共固定药物对HeLa细胞抑制率。并采用荧光显微镜及流式细胞仪行Hoechst33258染色定性分析和磷脂酰丝氨酸外翻定量分析细胞凋亡。结果表明低剂量20ng/well的共固定细胞因子对HeLa细胞的生长抑制具有时间效应,作用第5d抑制率达到92%,游离细胞因子作用第3d达到最大抑制率76%,第6d抑制率减少到41%。Hoechst33258细胞形态学研究显示,药物作用6d时,20ng/well共固定细胞因子诱导的凋亡效果比游离细胞因子的更为显著。流式细胞仪磷脂酰丝氨酸外翻定量分析表明作用第6d,20ng/well共固定药物诱导宫颈癌细胞早中期凋亡的比率比同样浓度游离药物凋亡率高14.8%。经光化学固定后低剂量细胞因子TNF-α/IFN-γ具有抑制HeLa细胞生长与诱导HeLa细胞凋亡的活性,并且共固定化细胞因子的抑癌活性和药效持续性比游离细胞因子显著。