基因枪法转化籼稻胚性愈伤组织获得可育的转基因植株

摘要

以籼稻胚性愈伤组织作为基因枪法转化的靶材料，建立了可重复的、高效的籼稻转化系统。从籼稻成熟胚诱寻生长3～4周的愈伤组织，经过2～6周继代培养后，可以形成足够量的颗粒状胚性意伤组织。用含有bar基因B.t.δ-内毒素基因的质粒pFWZ16轰击转化胚性愈伤组织，在含2～4mg／LBasta的培养基上进行筛选、预再生、再生及长根培养，并通过干燥处理增加再生频率和出苗数。从接种到获得转化小植株只需要4～5个月。供试的两个品种为华南地区推广的优良籼稻品种，共轰击821块胚性愈伤组织，获得48个系的477株Basta抗性植株。经PCR扩增分析和Southernblot杂交分析证实外源的bar基因和B.t.基因己整合到转基因水稻植株基因组中，Basta抗性鉴定和PNA点杂交分析表明这两个基因在转基因植株中得到表达。87.5％的转基因植株可育。Basta喷施实验和Southernblot分析证明bar基因和B.t.基因已遗传至子代，并且主要按孟德尔规律进行分离。