血小板反应蛋白1通过活化转化生长因子β1促进人间皮细胞间皮间叶转化

摘要

目的探讨血小板反应蛋白1(TSP-1)对TGF-β1活性的调控在人间皮细胞间皮间叶转化(MMT)中的作用及其机制。方法体外培养人间皮细胞株(Met-5A细胞),与无血清培养基组(对照组)比较,测定外源性TSP-1刺激下(以5ng/mL的TSP-1刺激为TSP-1小剂量组,以10ng/mL的TSP-1刺激为TSP-1大剂量组)Met-5A细胞中TGF-β1的表达和活性,Smad通路活化,以及MMT标志因子纤维连接蛋白(FN)、人Ⅲ型胶原蛋白(CollⅢ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Snail的表达。同时观察5ng/mL的TSP-1和10mg/mL的TGF-β1中和抗体刺激下(中和组)Met-5A细胞中Smad通路活化和MMT发生的变化。结果 TSP-1小剂量组和TSP-1大剂量组对Met-5A细胞中TGF-β1表达量和活性的上调作用均呈时间依赖性(P值均0.05)。故之后的实验均应用5ng/mL的TSP-1刺激细胞。TSP-1小剂量组在刺激24、48、72h时Met-5A细胞中FN、CollⅢ、Snail和α-SMA mRNA的相对表达量均显著高于对照组同时间点(P值均<0.05),FN、CollⅢ、Snail和α-SMA蛋白的相对表达量均显著高于对照组刺激0h时(P值均<0.05)。TSP-1小剂量组在刺激10、30、60、120min时Met-5A细胞中p-Smad2/3/Smad2/3蛋白的相对表达量均显著高于对照组刺激0h时(P值均<0.05)。TSP-1小剂量组在刺激24、48、72h时Met-5A细胞中的FN、CollⅢ、Snail和α-SMA mRNA相对表达量均显著低于对照组刺激0h时和中和组同时间点(P值均<0.05)。结论 TSP-1通过活化TGF-β1/Smad信号通路促进人间皮细胞MMT的发生。