肿瘤坏死因子-α、白介素-8和转化生长因子-β对人胸膜间皮细胞表达水通道蛋白1的影响

摘要

本研究从病人漏出性胸腔积液中分离培养人胸膜间皮细胞,经过免疫组织化学鉴定后,用MTT法研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素8(IL-8)和转化生长因子(TGF-β<,1>)对体外培养的人胸膜间皮细胞的损伤作用的量效关系;用免疫印迹技术(Western blot)方法探讨AQP<,1>的表达,并研究在TNF-α、IL-8和TGF-β作用下,培养人胸膜间皮细胞表达AQP<,1>的时相变化.从而为了解炎症因子和AQP分子表达的关系,加深对炎症胸腔积液机制的认识,并为开发控制胸腔积液的药物提供理论基础.方法和结果:一.体外培养人胸膜间皮细胞的鉴定.在倒置相差显微镜下,体外培养的人胸膜间皮细胞呈圆形、椭圆形、多边形等,细胞生长融合后呈典型的卵石样或铺路石样.细胞免疫荧光化学检测显示:体外培养的人胸膜间皮细胞呈抗细胞角蛋白抗原阳性,抗波形蛋白抗原阳性,抗Ⅷ因子相关抗原阴性,符合人胸膜间皮细胞的特征.二.TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>对体外培养的人胸膜间皮细胞存活率的影响的量效关系.在10<'-8>~10<'-4>g/ml浓度范围内,TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>对体外培养的人胸膜间皮细胞存活有剂量依赖性抑制作用.其中,以TNF-α的量效曲线的斜率最大,IL-8的量效曲线的斜率最小.TNF-α抑制培养人胸膜间皮细胞的量效关系的回归方程为:y=79.56-8.50x,r=0.9568,n=15;IL-8抑制培养人胸膜间皮细胞的量效关系的回归方程为:y=96.86-4.081x,r=0.9124,n=15;TGF-β<,1>抑制培养人胸膜间皮细胞的量效关系的回归方程为:y=78.00-7.239x,r=0.9764,n=15.【y为培养的人胸膜间皮细胞存活率﹪,x为细胞因子浓度(ng/ml)的对数值】三.培养的人胸膜间皮细胞有AQP<,1>表达.Western blot显示:AQP<,1>在SDS凝胶中的迁移率相当于分子质量28kD(AQP<,1>的分子质量).与同等量上样蛋白的人胚肾细胞相比,人胸膜间皮细胞的AQP<,1>表达量低于人胚肾细胞.四.炎症细胞因子TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>增强培养人胸膜间皮细胞AQP<,1>表达的时-效关系Western blot显示:在加入TNF-α、TGF-β<,1>或IL-8 0.5h人胸膜间皮细胞上AQP<,1>的表达即增加.此后加入TNF-α组的人胸膜间皮细胞上AQP<,1>的表达继续增加,6h达到峰值;而加入TGF-β<,1>或IL-8组的人胸膜间皮细胞上AQP<,1>的表达均有所回降,其后再次增加,在48h达到第二个更高的峰值.结论:1.人胸膜间皮细胞有AQP<,1>表达,与同等量上样蛋白的人胚肾细胞相比,人胸膜间皮细胞的AQP<,1>表达低于人胚肾细胞.2.炎症细胞因子TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>对培养的人胸膜间皮细胞存活有剂量依赖性的抑制作用,其中,以TNF-α的量效曲线的斜率最大,IL-8的量效曲线的斜率最小.3.炎症细胞因子TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>可上调人胸膜间皮细胞AQP<,1>的表达.4.TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>增强人胸膜间皮细胞AQP<,1>的表达,有明显的时效关系.早期以TNF-α的作用明显,但作用时间短暂,后期则以IL-8和TGF-β<,1>作用明显,尤以TGF-β<,1>为著.

目录

文摘

英文文摘

前言

材料和方法

结果

讨论

一.胸腔积液发生的动力学过程

二.人胸膜间皮细胞的取材、分离、体外培养和鉴定

三.细胞因子TNF-α、IL-8和TGF-β1对培养人胸膜间皮细胞存活的影响

四.人胸膜间皮细胞AQP1的表达

五.细胞因子TNF-α、IL-8和TGF-β1对人胸膜间皮细胞AQP1表达的时效关系

结论

展望

参考文献

英文缩写与中文对照

致谢

原创性声明