诺如病毒病毒样颗粒的表达及其与HBGAs受体的结合研究

摘要

目的:以杆状病毒为载体,在昆虫细胞sf9中表达GⅡ-4型野生株诺如病毒(Noroviruses,NoV)GZ121的衣壳蛋白ORF2,并验证其与组织血型抗原(Histoblood group antigen,HBGAs)受体的结合活性。方法:双酶切质粒PMD18-T-GZ121 ORF2酶切,连接入线性化载体PFastBacTM1,获得重组转座载体pFastBac-GZ121 ORF2,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统获得重组杆状病毒,将其转染昆虫sf9细胞进行蛋白表达,用蔗糖超离方法纯化以及免疫印迹、透射电镜等方法鉴定表达产物,用EIA法检测NoV-VLP与HBGAs的结合特性。结果:成功表达了分子量约为58 kD的NoV衣壳蛋白,大小约30 nm与预期相符,NoV-VLP与A、B、O型均能结合,与非分泌型唾液不结合,结合方式与rVA387相一致。结论:我国优势流行株GⅡ4型NoV病毒样颗粒(Virus-like particles,VLP)的表达成功及NoV-VLP和HBGAs受体结合模型的建立,为我国NoV疫苗的开发和防治药物的研究奠定了基础。