PAK2真核表达载体的构建及在胃癌细胞内的表达与定位

摘要

目的构建PAK2真核表达载体及证实在胃癌细胞内的表达与定位。方法提取HeLa细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增PAK2全长编码基因,克隆至pcDNA3.1A表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到胃癌细胞SGC-7901中,Western blot检测蛋白表达,免疫荧光检测PAK2在胃癌细胞内的定位。结果 hPAK2全长基因序列克隆到了真核表达载体pcDNA3.1A中,酶切鉴定片段为2 000 bp。Western blot检测到重组质粒蛋白表达,分子量约为75 kDa。免疫荧光检测pcDNA3.1A-PAK2在胃癌细胞内的定位以细胞浆为主,细胞核内少许。结论成功构建hPAK2全长基因真核表达载体,重组质粒主要定位于胃癌细胞浆。