SAPK/JNK活性的非放射性测定方法与初步应用

摘要

目的　建立SAPK/JNK活性的非放射性测定方法。方法　采用“免疫沉淀法”提取SAPK ,根据SAPK可以使底物c Jun(Ser6 3和Ser73)磷酸化的原理 ,以N 末端融合有c Jun的谷胱甘肽Seharosebeads从细胞裂解液中“亲合分离”SAPK ;然后进行体外磷酸化 ;以c Jun的磷酸化特异性抗体进行蛋白质免疫印迹杂交 ;最后以“化学发光法”测定磷酸化底物c Jun来反映细胞内SAPK的活性。结果　以 2 5～ 10 0 μmol/LCdCl2处理豚鼠肾上腺皮质细胞 2小时 ,细胞内SAPK活性随染毒剂量增加而轻度增加。结论　该法测定细胞内SAPK活性 ,方法灵敏、特异性强。