神经肽Y对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

摘要

目的应用激光共聚焦显微镜动态观察神经肽Y(NPY)受体激动剂[Leu31,Pro34]-NPY干预大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)产生的细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度变化,以确定NPY对大鼠VSMC[Ca2+]i浓度的影响。方法用分散细胞培养法培养VSMC。用10μmol/L的Fluo-3孵育细胞。使其与细胞内的游离[Ca2+]i相结合,从而能够在525nm的激发光激发下产生荧光。分别用正常细胞外液、无钙细胞外液稀释的10-6mol/L[Leu31,Pro34]-NPY、1μmol/L硝苯地平、10-6mol/L[Leu31,Pro34]-NPY+1μmol/L硝苯地平灌流细胞,同时用激光共聚焦显微镜扫描、记录图像。用Leica图像分析系统分析图像,定量分析不同情况下的[Ca2+]i荧光强度。结果正常细胞外液灌流时[Ca2+]i变化不明显,最高值为57.3±3.1,最低值为53.7±2.9,无明显差异(P>0.05)。[Leu31,Pro34]-NPY干预细胞时,[Ca2+]i明显地升高,随后又开始下降。最高值为86.4±2.7,最低值为58.1±3.0,有非常显著差异(P0.05);[Leu31,Pro34]-NPY+硝苯地平组[Ca2+]i变化不明显,最高值为52.6±2.1,最低值为51.7±2.7,差异无统计学意义(P>0.05)。硝苯地平组[Ca2+]i呈下降趋势,最高值为52.8±2.2,最低值为37.5±2.1,有非常显著差异(P<0.01)。结论NPY能够通过NPY-Y1受体使细胞内的[Ca2+]i浓度升高,这种升高是依赖于细胞外的[Ca2+]i由L型[Ca2+]i通道进入细胞的。