+Gz重复暴露大鼠脑cDNA消减文库的构建

摘要

目的应用抑制性消减杂交技术构建 +Gz重复暴露大鼠脑和正常大鼠脑差异表达的cDNA消减文库 ,为筛选 +Gz暴露大鼠脑差异表达基因 ,探讨 +Gz引起脑损伤的分子机制奠定基础。方法Wister大鼠随机分成对照组和 +Gz重复暴露组 ,对照组大鼠G值为 + 1Gz,实验组大鼠在动物离心机上经历了 3次+ 1 0Gz/1min(两次间间隔 30min)作用 ,于暴露后 6h处死取脑。分别从 +Gz重复暴露组和对照组大鼠脑中提取poly(A) +RNA ,依次合成单链及双链cDNA ,用RsaⅠ酶切成大小不等的片段。将 +Gz重复暴露组cDNA分为两组 ,分别与两种不同的接头连接 ,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR ,将PCR产物与T/A载体连接构建 +Gz暴露大鼠脑cDNA消减文库。结果成功构建具有高消减效率的 +Gz暴露大鼠脑cDNA消减文库 ,非特异性cDNA片段被有效地消减 ,特异表达的cDNA得到富集。结论 +Gz暴露大鼠脑cDNA消减文库的建立为进一步筛选、克隆 +Gz重复暴露大鼠脑差异表达基因奠定了基础。