苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)大立方形多角体突变株的分子生物学研究

摘要

利用空斑技术，从既能形成多角体又含ＴＫ酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫ中，纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫｍｔ５１３。用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＢｇｌⅡ及ＫｐｎⅠ等限制性内切酶对它做了酶切分析，并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分全序列测定结果，发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变，导致了第２５位的氨基酸密码子由ＧＧＴ变为ＧＡＴ，该位氨基酸由甘氨酸（Ｇｌｙ）变为天冬氨酸（Ａｓｐｑ）还利用ＰＣＲ技术扩增出突变了的多角体蛋白基因部分片段，并将它克隆入转移载体质粒ｐＥＶ５５，与不形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ＨＢｓＤ４ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞，结果产生同样的大立方形多角体病毒。