抗FLAG标签单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

摘要

碳化二亚胺法合成FLAG-BSA完全抗原,利用杂交瘤技术制备5株分泌抗FLAG标签单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备腹水,并对其进行纯化、分析和鉴定。制备交联抗FLAGmAb亲和层析柱,纯化带FLAG标签的融合蛋白,经SDS-PAGE电泳后薄层扫描分析纯度,用Western-blotting检测mAb对融合蛋白的反应性。结果表明:5株细胞分泌的单抗都为IgG类型、IgG1亚类,腹水效价均高于1∶106,且5株单抗与其它融合蛋白标签无交叉反应性;亲和层析纯化后蛋白纯度达85%以上,5株单抗均可用于融合蛋白的Western-blotting检测,建立了可用于FLAG融合蛋白纯化和检测方法。