小续命汤改善心肺复苏后大鼠神经功能及脑保护作用

摘要

[目的]研究小续命汤对心肺复苏后大鼠的脑保护作用及机制研究。[方法]将63只SPF级SD雄鼠按照随机数字表分为对照组(8只)和建模组(55只)。建模大鼠使用经皮心外膜电刺激法建立大鼠心脏骤停模型,将建模成功大鼠进行心肺复苏,当大鼠恢复自主循环表示大鼠心肺复苏建模成功。将建模成功的大鼠随机分为5组,小续命汤高、中、低剂量组、二甲基亚砜(DMSO)组和模型组。大鼠心肺复苏后10 min,小续命汤高、中、低剂量组灌胃300、150、75 mg/kg小续命汤。DMSO组灌胃100 mg/kg的DMSO,模型组和对照组均灌胃等体积生理盐水,每日1次,治疗7 d。治疗前后对大鼠神经功能进行评分;通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠脑海马组织病变;用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组大鼠脑海马组织氧化应激指标脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)浓度;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测大鼠脑海马组织胞浆蛋白伴侣分子(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)mRNA表达水平;通过蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠脑海马组织中Keap1、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。[结果]大鼠治疗后神经功能评分,模型组高于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);对照组脑海马区组织神经元无明显病变,模型组可见神经元排列稀疏且凌乱,神经元出现明显水肿,细胞核肿胀,胞浆空泡样变,DMSO组、小续命汤高、中、低剂量组病变均出现好转;大鼠脑海马组织MDA含量模型组高于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);SOD含量模型组低于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均高于模型组(P<0.05);Keap1 mRNA和蛋白相对表达量模型组均低于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白相对表达量模型组高于对照组(P<0.05),DMSO组、小续命汤高、中、低剂量组均高于模型组(P<0.05)。[结论]小续命汤可改善心肺复苏大鼠神经功能,减轻脑海马组织损伤,抑制氧化应激,推测其机制可能与激活Keap1-Nrf2/HO-1信号通路,下调Keap1 mRNA和蛋白表达,上调Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白表达水平有关。