人细胞色素P450 2A13与GFP融合基因共表达慢病毒载体的构建与表达

摘要

目的:构建人细胞色素P450 2A13(CYP2A13)基因与绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)共表达的慢病毒载体,并转染肺腺癌A549细胞使之持续高表达CYP2A13基因。方法:采用基因重组技术,将CYP2A13基因与GFP连接,构建慢病毒载体。转染293T细胞,包装后产生病毒液,测定其滴度。包装后的病毒感染A549细胞。激光共聚焦显微镜检测GFP-CYP2A13融合蛋白在A549细胞中的定位;Real-time PCR和Western blot检测A549细胞中CYP2A13表达情况。结果:成功构建人细胞色素CYP2A13基因与GFP共表达的慢病毒载体,转染293T细胞后,荧光显微镜下可见有大量的绿色荧光。激光共聚焦显微镜观察,感染后的A549细胞的胞核和胞浆中有绿色荧光,Real-time PCR和Western blot检测到A549细胞中CYP2A13的高表达。结论:成功构建了CYP2A13与GFP基因共表达的慢病毒表达载体,为研究CYP2A13基因与呼吸系统肿瘤的关系,提供了稳定的感染细胞的载体。