菜豆荚斑驳病毒RT-PCR扩增产物胶体金层析检测方法的建立

摘要

菜豆荚斑驳病毒是我国进境植物检疫性有害生物,为了能在现场快速检测出该病毒,将PCR核酸扩增的高灵敏度和胶体金层析方法快速简便、直观的优点结合起来,建立了PCR扩增产物的胶体金层析检测方法。该方法是用生物素标记上一个引物,用荧光素（或地高辛）标记上另一个引物,通过PCR扩增产生双标记的扩增产物。将兔抗生物素多克隆抗体与20-30 nm大小的胶体金颗粒结合上并固定在释放垫上,同时在硝酸纤维素层析膜上点上抗荧光素（或地高辛）的单克隆抗体作为T检测点,点上羊抗兔多克隆抗体作为C质控点。这种RT-PCR扩增产物可在T点上被检测到,同时C点也要显色。用所建立方法在15 min内可检测出菜豆荚斑驳病毒的RT-PCR扩增产物,免去了溴化乙锭染色和电泳的过程。