鹅细小病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

摘要

本研究选取实验室最新分离的鹅细小病毒制备单克隆抗体及多克隆抗体,并在此基础上建立了用于快速检测GPV的胶体金免疫层析的方法.通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,并将其标记于纯化的抗GPV单克隆抗体制备免疫胶体金,将兔抗GPV多克隆抗体及羊抗鼠IgG抗体分别喷涂于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,并按一定步骤组装后制成检测GPV的免疫胶体金试纸条.试验结果表明,所制备GPV检测试纸条敏感性比琼脂扩散试验高出100倍,且对GRV,AIV,NDV等主要水禽疾病的检测结果为阴性.将试纸条储存于4°C冰箱4月后重新进行试验,结果显示特异性及敏感性没有出现明显下降.对92份疑似病例分别进行PCR检测,琼脂扩散检测及免疫胶体金检测,其中PCR试验的检出率为94％,胶体金试验的检出率为82％,而琼脂扩散试验几乎没有检测出阳性样品.在本研究中建立的鹅细小病毒免疫胶体金试纸条检测方法具有良好的特异性,敏感性和稳定性,为鹅细小病毒的快速诊断提供了新的方法.