哈茨木霉A25-2纤维二糖水解酶Ⅰ基因的克隆及其编码催化功能域的序列在绿色木酶HP35-3中的表达

摘要

本研究从哈茨木霉(Trichoderma harzianum)A25-2总RNA中利用RT-PCR的方法扩增到其纤维二糖水解酶Ⅰ基因的cDNA序列,并对该基因编码的氨基酸序列进行分析,得到cbhⅠ基因中编码催化功能域的序列。将催化功能域编码序列克隆到表达载体pCP-GH中,用PEG-CaCl2介导的原生质体转化方法将重组质粒转化到绿色木霉(Trichoderma viride)HP35-3中,筛选得到12个转化子。以p-NPC为底物,测定了该12个转化子的酶活力,获得比活力最高的转化子Tv/CD Hl-CBM-5,其纤维二糖水解酶活力是HP35-3的3.8倍。SDS-PAGE分析表明,绿色木霉表达了导入的含A25-2纤维二糖水解酶Ⅰ催化功能域的编码序列。