干扰精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因拮抗多胺类似物二乙基去甲精胺抗前列腺癌细胞增殖活性

摘要

目的探讨多胺类似物二乙基去甲精胺(DENSPM)对去势抵抗性前列腺癌PC3细胞的体外作用,以及干扰精脒/精胺N1乙酰基转移酶(SSAT)基因表达对DENSPM作用的影响。方法构建SSAT小干扰RNA质粒(siRNA),并应用脂质体转染试剂Lipofectamine 2000转染PC3细胞,转染24h后加入预先配置好的DENSPM。DENSPM处理48h后收集细胞进行细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖活性实验、流式细胞周期实验,抽提RNA和总蛋白分别进行实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹杂交,验证SSAT siRNA的干扰效果,检测DENSPM处理后SSAT mRNA和蛋白质的表达水平。采用高效液相色谱法(HPLC法)检测转染和药物处理后各组细胞内的多胺含量。结果空白对照组和DENSPM+siRNA组培养36、48、72h时的PC3细胞增殖活性均显著高于DENSPM组同时间点(P值均0.05)。DENSPM组的SSAT mRNA和蛋白表达量分别为15.10±0.12和1.56±0.06,显著高于空白对照组的1.00±0.00和0.60±0.01,以及DENSPM±siRNA组的1.07±0.03和0.62±0.02(P值均<0.01)。结论多胺类似物DENSPM可抑制去势抵抗性前列腺癌PC3细胞增殖,诱导S期阻滞,诱导SSAT表达上调,促进多胺降解代谢。干扰SSAT表达可拮抗DENSPM的抗癌作用。