自身抗原核点蛋白Sp100基因克隆和真核表达

摘要

目的:克隆人核点蛋白自身抗原Sp100基因, 构建重组表达质粒,获得具有免疫学活性的纯化重组蛋白．方法:从人类肝脏cDNA文库中扩增出Sp100 的基因片段,克隆至PEGH表达载体进行诱导表达,并对表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定．结果:经重组质粒测序结果证实,Sp100目的基因已正确插入真核表达载体中,基因序列正确,符合表达框架;SDS-PAGE检测表达产物分别在53 ku,55 ku,52 ku,37 ku,42 ku,47 ku 处有一明显的蛋白表达条带,Western blot分析表明重组蛋白2,3,5,6具有人sp100抗原反应性．结论:本研究成功克隆人核点蛋白自身抗原 Sp100基因,并将其在酵母菌中成功表达．