精胺/精眯N^1-乙酰基转移酶重组蛋白的原核表达及其抗体制备

摘要

目的探讨精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)的原核表达及抗SSAT多克隆抗体的制备。方法RT-PCR法从人肺癌细胞总RNA中克隆SSATcDNA后,构建SSAT原核表达质粒pET15b/SSAT并转化BL21(DE3)大肠杆菌细胞。SSAT重组蛋白经IPTG诱导表达后,利用PAGE凝胶纯化和Ni-NTA亲和层析纯化。用凝胶纯化的SSAT重组蛋白免疫家兔以制备抗SSAT多克隆抗体,所得抗体的特异性及效价用Western blot和ELISA技术检测。结果SSAT重组蛋白可在大肠杆菌中诱导性高表达,用此蛋白免疫动物所得的SSAT抗体的效价以及特异性均较高。结论建立了SSAT原核表达系统并成功制备出SSAT多克隆抗体。