PCR用于诊断人类埃立克体病方法的建立

摘要

[目的 ]建立一个快速、简便的检测埃立克体感染的实验方法 ,用于人类埃立克体病的临床诊断及分子流行病学调查。 [方法 ]用查菲埃立克体分离株 (91HE17)感染犬巨噬细胞 (DH82细胞 ) ,感染 40天后收集 DH82细胞。根据查菲埃立克体 16 S r RNA基因序列设计引物 ,特异性扩增查菲埃立克体 DNA。运用限制性片段长度多态性分析对PCR扩增产物进行鉴定。 [结果 ]扩增产物经过 1.5 %琼脂糖凝胶电泳和 5 %聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)电泳分析 ,并用PGEM- 3Z(+ ) /Hae DNA Marker作为核酸分子量参照物 ,证实扩增产物是查菲埃立克体 16 S r RNA基因序列的389bp核酸片段。将扩增产物用 Hae 消化后 ,进行限制性片段长度多态性 (RFL P)分析。产生预期 338bp和 5 1bp酶切片段。 [结论 ]引物 HE1和 HE3具有高度特异性。 PCR反应是具有高度敏感性和特异性 ,可作为对人类埃立克体病疫源地、传播媒介及储存宿主进行调查的有效方法。