中间偃麦草染色体2Ai-2特异PCR新标记的建立和St基因组特异序列的克隆

摘要

对中间偃麦草麦、小麦和小麦 中间偃麦草 2Ai 2附加系Z1、Z2、Z6 ,代换系ZD2 8等进行RAPD分析 ,从 32 0个RAPD引物中 ,鉴定出 2Ai 2染色体特异的 2个RAPD标记OPO0 5 6 50 和OPM0 4 1 40 0 。利用这 2个特异RAPD引物OPO0 5和OPM0 4 ,PCR扩增普通小麦CS(ABD)及其近缘植物中间偃麦草 (E1 E2 St)、拟鹅冠草 (St) ,长穗偃麦草 (E)、簇毛麦(V)、黑麦 (R)、大麦 (H)、粗山羊草 (D)等基因组DNA。结果表明 ,OPO0 5 6 50 和OPM0 4 1 40 0 均是 2Ai 2染色体上St基因组区域的特异标记。将上述 2个特异片段分离回收、克隆、测序 ,根据测序结果重新设计、合成特异引物 ,成功地转换RAPD标记为SCAR(sequencecharacterizedamplifiedregion)标记SC O5和SC M4。利用SCAR标记对不同材料进行分析的结果表明 ,凡含有 2Ai 2染色体的抗黄矮病材料及拟鹅冠草均产生一条扩增带 ,不含 2Ai 2染色体的材料 ,包括小麦、长穗偃麦草、簇毛麦、黑麦、大麦、粗山羊草以及含有其他中间偃麦草染色体的附加系 ,均没有扩增产物 ,说明上述 2个SCAR标记是中间偃麦草 2Ai 2染色体的特异性PCR标记 ,且是 2Ai 2染色体上St基因组区域的特异性标记。克隆与鉴定中间偃麦草的 2个SCAR扩增片段TiSCO5和TiSCM4 ,结果表明 。