透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在大肠杆菌中的高效表达

摘要

利用PCR技术将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)克隆到融合表达载体pET28 a,在大肠杆菌BL21(DE3)表达。重组蛋白在30℃诱导获得可溶表达。利用N i2+亲和层析对重组蛋白进行了纯化,得到重组的透明颤菌血红蛋白,蛋白呈红色。实验现象显示重组蛋白与血红素相结合。紫外光区和可见光区波长扫描分析显示:蛋白粗提物和纯化后的血红蛋白在230 nm和413 nm都有强吸收峰,初步表明,尽管重组蛋白比天然蛋白多36个氨基酸,重组蛋白仍然具有生理活性。诱导后4 h和6 h的培养液氨基乙酰丙酸含量分别达到17 mg/L和21 mg/L,说明重组蛋白的表达明显促进了体内hem e合成途径。