一套系统培养鼠主动脉血管壁细胞简单可靠的方法

摘要

目的探讨一套系统培养鼠主动脉血管壁成分细胞的简单、可重复的方法。方法分别采用植块贴壁法进行主动脉血管平滑肌细胞和血管外膜成纤维细胞、结扎贴壁法进行血管内皮细胞的原代培养,胰酶消化传代;差速贴壁法及自然纯化法进行细胞纯化;转化生长因子β1诱导血管外膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞;相差显微镜及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、血小板/内皮细胞黏附分子（CD31）、波形蛋白（Vimentin）抗体两两联合的方式分别进行形态学和免疫细胞化学鉴定。结果组织及细胞活性良好,血管平滑肌细胞及血管外膜成纤维细胞原代培养周期为10-12天,血管内皮细胞为12-14天。传代培养周期为7-10天。经纯化传代后的细胞纯度达95%-100%。血管平滑肌细胞呈典型的＂峰-谷＂状生长,α-SMA（＋）/Vimentin（-）;血管内皮细胞呈＂铺路石＂样外观,CD31（＋）/α-SMA（-）;血管外膜成纤维细胞形态和血管平滑肌细胞不易区分,Vimentin（＋）/α-SMA（-）,诱导的肌成纤维细胞Vimentin（＋）/α-SMA（＋）。原代细胞传至10代以上仍未见生长活力减退。结论我们建立了一套系统培养纯度高、生长状态良好的大鼠主动脉血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血管外膜成纤维细胞及肌成纤维细胞的简单可靠、重复性好的方法。该法对培养小鼠主动脉壁成分细胞仍然适用。