不同年龄人骨髓间充质干细胞体外生长特性分析

摘要

目的建立人骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MMSCs)体外分离培养和扩增方法,观察不同年龄人MMSCs在体外培养的生长特性,为MMSCs的临床应用提供技术方法和依据。方法采集10～60岁之间的人骨髓血,密度梯度法分离出单个核细胞,利用DMEM/F12培养基添加胎牛血清进行黏附培养和扩增MMSCs,分析第3代MMSCs生长情况和形态变化,细胞计数,用MTT法观察其增殖及生长特征,免疫组化法分析MMSCs的纯度。结果10～60岁人MMSCs均贴壁生长,呈典型MMSCs形态和生长特征,传代细胞的增殖速度比原代细胞快,但随着年龄的增长,原代及传代培养MMSCs的增殖能力下降,生长周期延长,其中CD105阳性细胞均大于95%,但老年人的CD105阳性细胞比率有所降低。结论密度梯度离心结合贴壁培养法可获得高纯度MMSCs,成人MMSCs在传代培养的增殖活性随年龄增加而降低。