抗人肺癌单克隆抗体3D_3 scFv基因构建及其在E.coli中的表达

摘要

由于免疫原性,鼠源性单克隆抗体在人体疾病治疗方面受到限制,运用基因重组技术,将抗体轻链、重链可变区基因连接,构建单链Fv(ScFv)基因.表达制备ScFv片段,由于其分子小,免疫原性弱,有潜在应用前景.本实验将获得的抗人肺癌单克隆抗体轻重链可变区基因,通过Linker基因序列连接并克隆至pIg20表达载体,表达制备抗人肺癌scFv融合蛋白.现报道如下.l 材料与方法1.1 抗人肺癌单克隆抗体3D_3(McAb3D_3)重链可变区基因(VH)克隆至表达载体pIg20,以SmaⅠ,XbaⅠ分别双酶切VH及pIg20质粒,以粘末端方式,将SmaⅠ-VH-Xba片段连接到pIg20载体,连接产物电穿孔法转染BL21菌,筛选鉴定.阳性子命名为pIgVH.1.2 将McAb3D_3轻链可变区基因(VL)克隆至pIgVH,以BgLⅡ、NcoⅠ分别消化中pIgVH及VL。