人源抗HBs基因工程抗体在E.coli中的高效表达与折叠研究

摘要

目的高效表达是基因工程抗体走向临床的关键问题之一。本试验旨在研究人源抗HBs基因工程抗体在E.coli中的高效表达与折叠。方法本实验将抗HBsAg抗体的轻链(L)和重链Fd段基因,分别克隆于pET20b质粒中并分别转化到大肠肝菌BL21(DE3),IPTG诱导后,SDS-PAGE分析发现在Mr27000(L)和Mr25000(Fd)处有外源蛋白表达,表达蛋白含量分别为53%和48%。L链和Fd包涵体蛋白经盐酸胍变性后,等量混合于折叠液中。结果L和Fd可复性形成了Mr约50000的蛋白,ELISA结果表明,复性蛋白具有与HBsAg结合的能力。结论抗HBsAg抗体Fab段在大肠杆菌中的表达与复性的成功,表明包涵体表达基因工程抗体在技术是可行的。