表达D型流感病毒HEF蛋白重组新城疫病毒的拯救及其免疫原性研究

摘要

D型流感病毒是近年来新发现的一种流感病毒,宿主范围、地域分布广泛,可与其它呼吸道病毒一起引起严重的牛呼吸道疾病,给家畜养殖业造成了威胁,并存在跨越种间屏障向人类传播的风险。国外的D型流感疫苗研究结果虽然并不理想,但已经在灭活苗和DNA疫苗两个方向都有所涉及,而国内对于D型流感疫苗的研究尚未有报道。D型流感病毒基因组由7个RNA片段组成,共编码9种蛋白。血凝素酯酶融合蛋白(hemagglutinin-esterase-fusion,HEF)是D型流感病毒唯一的糖蛋白,具有A型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)蛋白的功能,同时有较强的免疫原性,是开发预防性疫苗的关键免疫原。本研究采用反向遗传学技术拯救了表达HEF蛋白的重组新城疫病毒,命名为rNDV-F-HEF(NDV97 F裂解位点替换为Lasota裂解位点的突变病毒);传代测序验证重组病毒的遗传稳定性,结果显示HEF基因在重组新城病毒rNDV-F-HEF中可以稳定遗传;Western-blot试验和间接免疫荧光试验表明rNDV-F-HEF能成功表达外源蛋白HEF;rNDV-F-HEF在鸡胚和雏鸡体内的毒力和生长能力与其亲本毒株NDV-F基本一致;rNDV-F-HEF肌肉注射免疫BALB/c小鼠的血清中含有HEF特异性Ig G抗体,其含量在三免后的第7天既能达到较高水平(约1800 ng/m L),说明rNDV-F-HEF具有防控IDV的潜质。重组病毒株rNDV-F-HEF可以用于IDV的预防性疫苗研发。