重组人MBD4蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及活性分析

摘要

为获得重组人MBD4蛋白,将编码MBD4的开放式阅读框(ORF)插入原核表达载体pGEX-6P1GST基因下游的多克隆位点(MCS).将获得的表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株扩大培养并用IPTG诱导融合蛋白的表达.用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和介质从菌体裂解液中纯化了GST-MBD4融合蛋白.经过Prescisionprotease专一性裂解成功去除了融合蛋白上的GST标签.通过MonoQ阴离子交换层析获得了纯度达94%以上的MBD4蛋白,该蛋白具有甲基化DNA结合和糖苷酶生物活性.